與新冠病毒檢測一樣,猴痘核酸檢測采用的也是熒光PCR法。
世界衛(wèi)生組織近日報告,已有超12個國家出現(xiàn)猴痘病毒感染病例,覆蓋歐洲、北美洲、大洋洲和非洲。為了檢測出這種病毒,上海多家體外診斷企業(yè)已行動起來,在很短時間內(nèi)研發(fā)出猴痘病毒核酸檢測試劑盒。目前,之江生物、默禾醫(yī)療、芯超生物等企業(yè)研發(fā)的這種產(chǎn)品獲得了歐盟CE認證,將進入國際市場。
兩種猴痘病毒毒性大不同。
默禾醫(yī)療董事長唐榮介紹,猴痘病毒與天花一樣,屬于正痘病毒。其外形為圓角磚形或卵圓形,大小為200—400納米,基因組是雙鏈DNA。在理化特性上,這種病毒介于天花和痘苗病毒之間,能抵抗乙醚,對干燥有較強抵抗力,但易被氯仿、甲醇和福爾馬林滅活。
人類與猴痘病毒交手已有半個多世紀。1958年,這種病毒首次在猴子群體中被發(fā)現(xiàn)。1970年,剛果民主共和國發(fā)現(xiàn)了首例人感染猴痘病毒的病例。然而在最近全球多國出現(xiàn)不尋常的猴痘疫情之前,大多數(shù)感染都發(fā)生在中非和西非地區(qū)。
猴痘病毒主要分為“剛果盆地分支”和“西非分支”兩種,前者的毒性較強,病死率約為10%;后者的毒力較弱,病死率約為1%。目前,歐美多國發(fā)現(xiàn)的猴痘病毒屬于毒性較輕的“西非分支”。
彩色透射電子顯微捕獲的猴痘病毒顆粒(英國《新科學(xué)家》)
與流感一樣,猴痘也是自限性疾病,即便不治療,也會自愈。一般的病程是:潛伏期為5—21天,感染者在前5天可能出現(xiàn)發(fā)熱、劇烈頭痛、淋巴腫大、肌肉疼痛和強烈氣喘等癥狀;隨后可能出現(xiàn)皮疹,皮疹會從面部逐步擴散到身體其他部位,尤其是四肢,最后會結(jié)痂脫落。
熒光探針還能為病毒分型
與新冠病毒檢測一樣,猴痘核酸檢測采用的也是熒光PCR法。PCR的意思是聚合酶鏈式反應(yīng),其基本原理是利用雙鏈DNA在高溫下解鏈、在低溫下結(jié)合的特性,通過控制溫度變化來模擬DNA在體內(nèi)的復(fù)制過程。這種技術(shù)能用于測定古生物化石、歷史人物遺體、犯罪嫌疑人毛發(fā)和體液中的DNA,也能用于測定病毒核酸。
利用熒光PCR法檢測猴痘、新冠等病毒前,科研人員要根據(jù)其核酸序列,設(shè)計出特異性可與病毒核酸結(jié)合的引物(20個左右核苷酸組成的寡核苷酸片段)。如果引物與目標核酸的結(jié)合性差,會影響試劑的靈敏度;如果引物還能與其他病原體核酸結(jié)合,則會降低試劑的特異性。
默禾醫(yī)療旗下公司研制的猴痘核酸檢測試劑盒
在DNA聚合酶的作用下,引物延伸并與因高溫而解鏈的DNA結(jié)合,變成2條鏈。PCR擴增儀再次調(diào)高溫度后,DNA再次解鏈,引物又會延伸并與之結(jié)合,變成4條鏈。如此升溫、降溫往復(fù)進行,病毒中的核酸片段就像孫悟空分身術(shù)一樣指數(shù)級擴增。
如何把擴增后的病毒核酸檢測出來?這要靠熒光探針(30個左右核苷酸組成的帶有熒光報告基團和淬滅基團的寡核苷酸片段)。它與引物一樣,也能與病毒核酸結(jié)合,未降解前不發(fā)光。被擴增的特異性片段越多,被降解的熒光探針也越多,發(fā)出的熒光量就越高,從而被儀器檢測出來。
唐榮表示,默禾醫(yī)療研發(fā)的試劑盒不僅能檢測出猴痘病毒,還能分型,即判定它屬于“剛果盆地分支”和“西非分支”。“我們的產(chǎn)品采用多重?zé)晒釶CR法,用不同的熒光探針識別猴痘病毒的分支,40分鐘就能出結(jié)果,比病毒基因測序方法要快得多?!?/p>
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